Invitrogen™ CyQUANT™ NF Zellproliferations-Assay

Beschreibung

Since the amount of DNA in cells is highly regulated, methods to detect DNA content offer improved accuracy over metabolism-based cellular proliferation or cytotoxicity assays, which can be affected by cell changes that are unrelated to cell number. CyQUANT cell proliferation assays use cell-permeant, DNA-binding dyes that enhance fluorescence when bound to nucleic acids to measure cellular DNA content. The resulting fluorescent signal can be compared to standards to determine cell number, enabling fast and sensitive microplate assays to measure cell proliferation and cytotoxicity.

Der Assay besteht aus einer zellmembrangängigen, DNA-bindenden, rot fluoreszierenden Sonde und einem nicht zellmembrangängigen Hintergrundsuppressor. Die Sonde und der Suppressor werden gemischt und zu den Zellen hinzugefügt. Die Sonde färbt alle Zellen, während der Suppressor nur in tote Zellen oder Zellen mit nicht intakten Zellmembranen eindringt und die Sondenfluoreszenz an diesen Stellen unterdrückt. Das Ergebnis ist, dass nur gesunde Zellen erkannt werden.

Zu den Funktionen der CyQUANT Direct Red Zellproliferationsassays gehören:

• Praktisch—Keine Waschungen, Zelllysen oder Temperaturausgleiche erforderlich; einfach hinzufügen und auslesen, um Veränderungen in der Proliferation adhärenter und Suspensionszellen zu erkennen
• Präzise – basierend auf der Menge an zellulärer DNA, die stark reguliert und unabhängig vom Stoffwechselzustand der Zellen ist
• Robust – die optimierte rote Fluoreszenzsonde und der Hintergrundsuppressor sorgen für einen hochempfindlichen Assay mit großem Dynamikbereich
• Stabil – Stabilität des roten Fluoreszenzsignals für sieben Stunden, ideal für große Screening-Assays
• Multiplex-fähig – kann mit spektral getrennten Fluoreszenz- oder Lumineszenzanzeigen kombiniert werden

Der CyQUANT Direkt-Assay ist ein roter fluoreszenzbasierter Zellproliferations- und Zytotoxizitätsassay für Mikrotiterplatten-Lesegeräte mit einem linearen Detektionsbereich von weniger als 100 bis 20.000 Zellen pro Well für die meisten Zelltypen. Der keine Waschung erfordernde Add-Mix-Read-Assay kann in einer Stunde abgeschlossen werden. Die rot fluoreszierenden Anregungs- und Emissionswellenlängen ergeben einen Assay, der ideal für das Multiplexing mit grünen fluoreszierenden Farbstoffen oder Proteinen ist. Außerdem ist das Fluoreszenzsignal mehrere Stunden lang stabil, was den Arbeitsablauf noch bequemer macht.

Da die DNA-Menge in Zellen stark reguliert ist, sind Nachweismethoden, die auf der Bestimmung der DNA-Menge basieren, sehr genau. Der CyQUANT Direct Red Zellproliferationsassay besteht aus einer rot fluoreszierenden, zellmembrangängigen, DNA-bindenden Sonde und einem Farbstoff für die Hintergrundunterdrückung. Die Sonde und der Suppressor werden gemischt, den Zellen hinzugefügt, eine Stunde lang inkubiert und anschließend die Fluoreszenz gemessen. Die Sonde dringt in alle Zellen ein, der Suppressor jedoch nur in tote Zellen oder Zellen mit beeinträchtigten Membranen. Beim Eintritt in tote und sterbende Zellen unterdrückt der Hintergrundsuppressorfarbstoff das Signal der fluoreszierenden Sonde, wodurch nur gesunde Zellen erkannt werden. Daher kann der CyQUANT Direct Red Assay zur Messung von Veränderungen der Proliferation sowie der Zytotoxizität eingesetzt werden.