Molecular Probes™ Click-iT™ HPG Alexa Fluor™ 594 Protein Synthesis Assay Kit

Das Click-iT™ HPG Alexa Fluor™ 594 Proteinsynthese-Assay-Kit bietet eine schnelle, empfindliche, ungiftige und nicht-radioaktive Methode zum Nachweis der Synthese von neu entstandenen Proteinen mittels Fluoreszenzmikroskopie, High-Content-Bildgebung oder Durchflusszytometrie. Im Kit enthalten sind L-Homopropargylglycin (HPG), ein Aminosäure-Analog zu Methionin, das einen Alkin-Anteil enthält, und Alexa Fluor™ 594 Azid. Das HPG wird kultivierten Zellen zugeführt und während der aktiven Proteinsynthese in Proteine integriert. Die Zugabe des Alexa Fluor™ 594 Azids führt zu einer chemoselektiven Ligation oder “Click-Reaktion zwischen dem grün fluoreszierenden Azid und dem Alkin, wodurch die modifizierten Proteine durch eine bildbasierte Analyse nachgewiesen werden können.

Nicht radioaktive Alternative: Alternative zum herkömmlichen ³⁵S-Methionin

Visualisierung von Massenproteindynamik: Fluoreszenzmarkierung von Proteinen ermöglicht die Bestimmung ihrer Lokalisierung, einschließlich Aggregation

Spezifität: Selektive, spezifische Reaktion zwischen Markierungs- und Nachweis-Tags

Stabilität: Das Produkt enthält eine irreversible, kovalente Bindung

Multiplex-aktiviert: Verwendung in Verbindung mit Click™-iT AHA (Azidaminosäure und Alkinfarbstoff) zum Nachweis räumlicher und zeitlicher Abweichungen

Anwendbar für biologische Probe: einfacher Nachweis, hohe Empfindlichkeit und niedriger Hintergrund, unabhängig von der Komplexität

Das Click-iT™ HPG Alexa Fluor™ 594 Proteinsynthese-Assay-Kit wurde erfolgreich mit HeLa-, A549- und U-2-OS-Zellen an einer Vielzahl von Reagenzien getestet, die die Proteinsynthese hemmen, einschließlich Cycloheximid und Anisomycin. Die Anwendbarkeit dieser Sonden zur Überwachung der Proteindegradation wurde auch mit Inhibitoren des Proteasoms (MG132 und Bortezomib) und Autophagie-Blockern (Chloroquin) in HeLa-Zellen nachgewiesen.

Aufgrund der Unterschiede in der Click-iT™ Chemie zwischen dem Click-iT™ HPG Alexa Fluor™ 594 Proteinsynthese-Assay-Kit und Click-iT™ AHA Alexa Fluor™ 488 HCS-Kit können diese Kits in Verbindung mit der räumlichen oder zeitlichen Bestimmung von Unterschieden in der Synthese neu entstandener Proteine verwendet werden.